Т.В. Олива, Г.И. Горшков
Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я.Горина
Введение
Известно, что у нормально развивающихся эмбрионов птиц желудочно-кишечный тракт свободен от микроорганизмов. Его заселение микрофлорой начинается с момента наклева цыпленком скорлупы яйца, в которой он развивался, и общения с внешней средой. В естественных условиях в этом участвуют микрофлора ротовой полости при научении наседкой цыпленка распознавать и принимать корм, а также находящиеся в окружающей среде фекальные микроорганизмы здоровой птицы, с которой он соприкасается. В условиях инкубатора первичный контакт происходит со стерильной средой, если тщательно проведена дезинфекция яиц и оборудования, или с искусственно сформировавшимся непрогнозируемым микробным составом, загрязняющим оборудование и помещения, нередко контаминированные патогенными штаммами. По данным В.М. Субботина [1, 2], в первые 5 суток наиболее активно заселяют кишечник эшерихии и энтерококки (высеваются соответственно из 100 и 90% проб). Лакто- и бифидобактерии к концу первых суток обнаруживаются в кишечнике соответственно у 40 и 20% цыплят. К 10-м суткам они есть у всех особей и в последующие сроки продолжают увеличиваться в своей численности. Стабилизация микробиоценоза устанавливается к 15-20 суткам, что зависит не столько от численности привнесенных полезных видов бактерий сколько от их колонизационных свойств [2]. По нашим данным [3] и данным ряда авторов [4, 5], к 34-42- суточному возрасту завершается направленное формирование бактериоценоза кишечника здоровой птицы. Сформированная полезная микрофлора обычно вытесняет патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, предотвращает возникновение и развитие эндогенной инфекции. Хорошо выражены свойства адгезии к кишечному эпителию у грамотрицательных бактерий - Escherichia coli, Klebsiella, энтерококки, но среди них есть и патогенные штаммы. Поэтому на перспективу стоит задача создания в кишечнике цыпленка уже с первых дней жизни таких условий, которые были бы благоприятны для развития нормальной полезной микрофлоры с наивысшими колонизационными способностями и сдерживали бы рост и развитие нежелательных видов. Такое направление исследований получило название конкурентного исключения (КИ). Так, в кишечник односуточного цыпленка вводили содержимое клоаки здоровой птицы, и у него формировался нормальный микробиоценоз, способствующий развитию иммунитета по типу взрослого организма. Было установлено, что продукты КИ должны применяться не позднее первых 24 часов после выведения из яйца. Однако эти исследования единичны и не позволяют существенным образом и надежно корректировать заселение микроорганизмами пищеварительного тракта цыплят-бройлеров в первые и последующие дни их жизни, поэтому дальнейший поиск способов и средств создания условий для КИ представляет научный интерес.
Цель настоящей работы - изучить бактериальную адгезию к кишечному эпителию и формирование состава микробиоценоза в разных отделах пищеварительного канала при выпаивании цыплятам в первую неделю жизни пребиотика лактулозы с тем, чтобы определить возможность его использования для стимуляции развития собственной полезной кишечной микрофлоры и вытеснения из микробиоценоза нежелательных видов.
Материалы и методы
Исследование проведено на базе лаборатории птицеводства ФГБОУ ВПО БелГСХА им.
В.Я. Горина. Из цыплят-бройлеров кросса Hubbard ISA были сформированы две группы (контрольная и опытная), по 10 голов в каждой. Опытной группе, находящейся на том же рационе, что и контрольная, выпаивали пребиотический препарат Лактусан российской фирмы «Фелицата», представляющий собой концентрат лактулозы (дисахарид - галактоза+фруктоза). Концентрация водного раствора лактулозы (1 мл/л) была подобрана с учетом нормального функционирования кишечника и с целью стимуляции роста находящейся в пищеварительном канале цыплят полезной микрофлоры.
На третьи и седьмые сутки от начала опыта из каждой группы отбирали по 3 цыпленка для патолого-морфологических и микробиологических исследований. В асептических условиях отбирали зоб, участок толстого кишечника с двумя слепыми отростками и прямой кишкой. Их содержимое (точную навеску) тщательно растирали с изотоническим раствором натрия хлорида и согласно методическим рекомендациям [6] готовили последующие десятикратные разведения (10-1;10-2;10-3;10-4; 10-5; 10-6;10-7). Для выделения и
культивирования бактерий производили посевы исследуемого материала на питательные среды: для энтеробактерий - на висмут-сульфитный агар, агар Эндо, среды Плоскирева, Симмонса и Левина; для энтерококков - на желточно-солевой агар; для гемолизирующих форм - на 5%-ный кровяной агар; для дрожжеподобных грибов - на агар Сабуро. По E. coli проводили скрининг гемолитических, лактозонегативных и со сниженной ферментативной активностью форм. Для культивирования лакто- и бифидобактерий использовали питательную среду (рН=6.8) следующего состава: 30.0 г панкреатического гидролизата казеина, 5.0 г экстракта пекарских дрожжей, 7.5 г глюкозы, 2.5 г лактозы, 0.5 г цистеина, 2.5 г натрия хлорида, 0.5 г магния сульфата семиводного, 0.5 г кислоты аскорбиновой, 0.3 г натрия ацетата трехводного, 0.75 г агара. Число колоний определяли после трехсуточной инкубации посевов при температуре 37°С. Из колоний готовили мазки и окрашивали их по Граму. Та
Одними из наиболее популярных услуг на рынке IT-технологий являются создание и продвижение лендингов. Они способны положительно влиять на деятельность любого бизнес-проекта в интернете. Судя по многочисленным отзывам, заказавшие создание лендингов люди ни разу не пожалели о потраченных деньгах. Они вложили в будущее, которое неразрывно связано с интернетом. Всё больше и больше предпринимателей обращаются к услугам разных агентств, веб-студий, чтобы заказать создание лендинга у профессионалов.