Методы разделения иммуноглобулинов

КАЗАХСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

Кафедра биохимии

РЕФЕРАТ

«Методы выделения иммуноглобулинов»

Выполнила Сулемейнова Г.

Руководитель: доктор биологических наук,

профессор Жумашев Ж.Ж.

Алматы, 1999 год

ВВЕДЕНИЕ

Иммуноглобулины - основные защитные белки организма, так как они обладают свойствами различных антител. Они содержатся в крови, молозиве и молоке, слюне и других жидкостях. С их ко­личеством и активностью связаны жизнестойкость, физиологичес­кое состояние и продуктивность животных.

В работе описаны свойства иммуноглобулинов, как белков, а также способы разделения иммуноглобулинов сельскохозяйственных животных.

Представленные данные по характеристике, выделению иммуноглобулинов, могут дать современные представления о защитных белках животных.

ИММУНОГЛОБУЛИНЫ - СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА

Важнейшие факторы специфического иммунитета - иммуноглобулины, осуществляют гуморальную защиту организма.

Дж.Хереманс (1959), изучая активность иммунной сыворотки человека, обнаружил, что антитела содержатся, по меньшей мере, в трех фракциях сыворотки: в g- и в двух фракциях b- глобулинов, называемых b₂ А и b₂ М - глобулинами. Эти фракции, актив­ные в иммунологическом отношении, Хереманс предложил назвать иммуноглобулинами (Ig). Предложение Дж.Хереманса легло в основу международной номенклатуры, принятой в 1664 г. специальной комиссией ВОЗ. По этой номенклатуре g-глобулин называется IgG, B₂ A-глобулин - IgA и В₂ М - IgM. Иммуноглобулин состоит из двух легких (L) и двух тяжелых (Н) полипептидных целей. Причем каждый класс иммуноглобулинов характеризуется особым типом тяжелых цепей g, m, a, d, e.

Легкие цепи бывают двух типов - k или l, каждвй из которых отличается С- концевой последовательностью аминокислот. Как тяжелые, так и легкие цепи состоят ив двух различных участков (областей) - вариабельной (V) и постоянной (С). С-концевая половина полипептидной цепи имеет постоянную амино­кислотную последовательность, а ее N - концевая часть - вариабельную. Каждый постоянный (С_l ) и вариабельный (V_l ) участок легкой цепи включает 107-110 аминокислотных остатков.

Тяжелые цепи построены их четырех участков - V_H , C¹ _H , C² _H , C³ _H . Вариабельные участки их состоят приблизительно из 110-114 аминокислотных остатков, постоянные - 330.

В вариабельной части полипептидных цепей находятся опре­деленные, так называемые "гипервариабельные участки", с наи­большим числом аминокислотных замен. В легких цепях они распо­ложены между 24-34; 52-55; 89-97 аминокислотными остатками. Гипервариабельные участки тяжелых цепей занимают аналогичные положения, но точная локализация их пока не установлена (Кульберг, 1975; Поляк 1981).

Наличие вариабельных участков дает молекулам антител воз­можность приспосабливаться к разнообразным антигенным детерми­нантам. Строение постоянных областей тяжелых цепей определяет эффекторные функции молекул к поверхностям макрофагов. В-лим­фоцитов, тучных клеток, а также проникновение через плацентар­ную мембрану (Егоров , 1972; Leslie, Cohen, 1973).

Гибкость молекул иммуноглобулинов, обеспечивающая приспо­собляемость к различным конфигурациям молекул антигена, обус­ловливается также наличием особого "шарнирного участка" в се­редине тяжелых цепей, содержащего много остатков аминокислоты пролина и препятствующего образованию вторичной структуры.

В настоящее время на основании изучения первичной струк­туры полипептидных цепей выдвинута так называемая "доменная" гипотеза строения иммуноглобулинов, согласно которой молекулу иммуноглобулинов можно разбить на участки с относительно неза­висимыми конфигурациями в виде глобул. Каждый домен состоит приблизительно из 100-110 аминокислотных остатков и имеет одну дксудьфидную связь, которая связывает участки цепей, образуя петлю из 60 аминокислотных остатков (Еdelman, 1970; Незлин, Рохлин, 1970; Роljak, 1972).

Молекула иммуноглобулина G состоит из 12 доменов: по 4 в тяжелых и по 2 в легких полипептидных цепях (рис.1). Используя молекулярные модели и ряд общих термодинамических принципов укладки третичной структуры белков, установлено, что конформации всех 12 доменов иммуноглобулина G характеризуются большим количеством b- складок и наличием одно-двух витков a- спиральной структуры (Завьялов, Троицкий, 1973).

На основании изучения воздействия протеолитических ферментов сделан вывод, что молекулы иммуноглобулинов состоят из в трех фрагментов двух типов, связанных гибкими участками полипептидных цепей: два из них названы Fab- и один Fc- фрагментами (Рогtег, 1959, 1960; Utsumi Karush, 1955, 1967).

В состав FAB- фрагментов входят целая легкая цепь и N - концевая половина тяжелой цепи. Структурная особенность FAB- фрагмента наличие двух глобулярных субъединиц - V и С. V построена из двух доменов V_H и V¹ _L , а С- из C_L и C¹ _H . Fc-фраг­мент содержит по два домена - C² _H и Сн³ (Роljak, 1972).

Рис. 1. Схема строения молекулы IgG1 человека (из книги Иммуноглобулины"