Молекулярные зонды

Характеристика молекулярных зондов

Молекулярные зонды - это короткие фрагменты ДНК, подходящие определённому организму (бактериям Nitrospira в данном случае), которые посредством определенных лабораторных методов могут использоваться, чтобы указать не только присутствие или отсутствие этого организма, но также и его относительные количества. Этим способом можно сравнить количество на одном биофильтре или субстрате с количеством на другом.

Актуальность темы определяется важностью разработки методов: исследования структуры жидкостей с помощью метода молекулярного зонда. Использование молекулярных зондов имеет большое распространение в спектральных методах (сольватохромные индикаторы) и при исследовании структуры материалов. Вместе с тем, актуальной является задача разработки теоретических основ метода молекулярного зондирования на базе исследования энергетических - энтальпийных характеристик сольватации. В качестве молекулярных зондов, как правило, используются молекулы, обладающие высокой симметрией и химической инертностью; альтернативно, могут использоваться образцовые молекулы – доноры или акцепторы электронов – для разработки шкал полярности растворителей или сравнения реакционной способности веществ.

Показано, что свойства молекулярного зонда являются важными при изучении энергетики взаимодействия в растворах в связи с возможными специфическими взаимодействиями.

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ (ГИБРИДИЗАЦИЯ С ДНК-ЗОНДАМИ) ДЛЯ УСКОРЕННОГО СКРИНИНГА ПАЦИЕНТОВ С ПОВЫШЕННЫМ РИСКОМ РАЗВИТИЯ МУЛЬТИРЕЗИСТЕНТНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА

Основные предпосылки

Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ ТБ) представляет собой серьезную проблему для здравоохранения в связи со сложностью его диагностики и лечения. Согласно оценкам ВОЗ, заболеваемость МЛУ ТБ составляет около 490 000 случае в год по всему миру, что составляет около 5% всех случаев туберкулеза. Проблема, однако, состоит в том, что вследствие различных проблем в лабораторной диагностике, в настоящее время, диагностируются лишь менее 5% случаев МЛУ ТБ. Значительный рост распространенности МЛУ ТБ и возникновение сверх устойчивых штаммов микобактерий (XDR TB), риск распространения устойчивых штаммов среди пациентов лечебных учреждений, а также очень высокие уровни смертности среди пациентов, инфицированных одновременно ВИЧ и МЛУ ТБ (либо XDR-TB) привели к необходимости скорейшей разработки и внедрения методов ускоренного скрининга лекарственной устойчивости (ЛУ).

Существуют тесты на лекарственную чувствительность (ТЛЧ), основанные на применении бактериологических методов, включают в себя процедуры выделения культур микобактерий из клинического материала, их идентификации с последующей диагностикой лекарственной чувствительности in vitro, что является весьма сложным и длительным процессом. Длительность лабораторных исследований ведет к назначению неадекватной терапии и, как следствие, развитию лекарственной устойчивости и продолжению распространения ЛУ штаммов микобактерий. В настоящее время идет активная разработка новых ускоренных молекулярно-генетических методов диагностики ЛУ. Среди последних, наиболее эффективными признаны методы, основанные на гибридизации с ДНК-зондами (MLPA).

Технология MLPA включает следующие этапы:

- ВыделениеДНК из культур M.tuberculosis либо непосредственно клинического материала;

- Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с применением праймеров, меченых биотином, для амплификации фрагментов генов, ассоциированных с лекарственной устойчивостью;

- Гибридизация биотин-меченых ПЦР-продуктов с ДНК-зондами, иммобилизированными на мембранах (полосках, изголовленных их нейлона либо аналогичных материалов).

- визуализация результатов гибридизации, при этом детектируется наличие микобактерий комплекса M.tuberculosis, а также наличие либо отсутствия мутаций в исследуемых генах. Учет результатов производится по наличие либо отсутствию цветных полосок на мембранах, соответствующих зондам дикого типа либо мутантным.

В состав ДНК-зондов включены зонды «дикого типа» (без мутаций), а также зонды для детекции наиболее часто встречающихся мутаций. Если в исследуемых фрагментах генов присутствует мутация, то «мутантный» ПЦР-продукт не свяжется с зондом «дикого типа», присутствующим на мембране. Таким образом, детекция мутаций производится по отсутствию сигнала одного или нескольких зондов дикого типа, а также, дополнительно, по присутствию сигнала от одного или нескольких «мутантных» зондов.

Приоритетные направления дальнейших исследований

Среди приоритетных направлений научно-исследовательской работы по изучению эффективности MLPA тест-систем можно выделить нижеследующие. При этом следует отметить, что дальнейшие исследования необходимо проводить одновременно со скорейшим внедрением указанных систем.

- оценка эффективности использования тест-систем в скрининговых и даигнотстических программах в регионах с различными эпидемиологическими показателями;

- оценка экономической эффективности и экономии средств при внедрении систем MLPA в различных программах по борьбе с ТБ;

- эффективность применения систем MLPA в сочетании с бактериологическими методами при проведении даигностики у больных с отрицательным мазком;

- влияние процедур инактивации и дезинфекции мокроты на чувствительность тест-систем MLPA;

- разработка и опт

Внимание, отключите Adblock

Вы посетили наш сайт со включенным блокировщиком рекламы!
Ссылка для скачивания станет доступной сразу после отключения Adblock!

Скачать