Ключевые слова: Точность репликации, мутагенез, предшественники ДНК, аналоги азотистых оснований, интзинтрифосфат пирофосфатаза.
Присутствие неканонических аналогов оснований в пуле природных предшественников ДНК снижает точность репликации ДНК. Мутагенные аналоги оснований могут быть причиной наследственных и онкологических заболеваний, что определяет актуальность детального исследования механизмов мутагенеза при действии аналогов. Простейшие эукариотические организмы – дрожжи S . cerevisiae являются удобной моделью для изучения механизмов мутагенеза, индуцированного аналогами оснований. Целью данной работы стало выявление генов, потенциально способных контролировать чувствительность к мутагенному аналогу ГАП, с использованием дрожжевой модели. В рамках цели исследования, были поставлены следующие задачи:
1) Клонировать человеческий ген ITPA в челночном векторе pESC для экспрессии указанного гена в клетках дрожжейгена,
2) Получить мутантные аллели человеческого гена ITPA,
3) Изучить эффекты экспрессии человеского гена ITPA дикого типа и его мутантных аллелей, в клетках дрожжей S . cerevisiae .
4) Очистить человеческий белок ITPA дикого типа и мутантные формы белка.
5) Проверить субстратную специфичность и активность очищенных белков.
В работе использовались методы классической генетики дрожжей, методы молекулярной генетики и биохимии, а именно: трансформация клеток дрожжей и бактерий, метод селективных сред, ПЦР,электрофореза белков и ДНК, рестрикции и легирования ДНК, метод сайт-направленного иутагенеза, методы жидкостной и тонкослойной хромотографии и другие методы.
Частично или полностью были выполнены все поставленные задачи. Получены вектора экспрессии pET15b, несущие ген ITPA и его мутантные аллели N16Q, N16T, P32T, E44L, F149A, W151A, D152A, K172A, H177A и R178A. Очищены соответствующие белки. Начаты работы по исследованию их ферментативной активности и по изучению эффектов экспрессии данных белков в клетках дрожжей. Полученные результаты имеют значение для понимания механизмов поддержания качественного и количественного состава пула предшественников ДНК.
Внимание, отключите Adblock
Вы посетили наш сайт со включенным блокировщиком рекламы!
Ссылка для скачивания станет доступной сразу после отключения Adblock!
Одними из наиболее популярных услуг на рынке IT-технологий являются создание и продвижение лендингов. Они способны положительно влиять на деятельность любого бизнес-проекта в интернете. Судя по многочисленным отзывам, заказавшие создание лендингов люди ни разу не пожалели о потраченных деньгах. Они вложили в будущее, которое неразрывно связано с интернетом. Всё больше и больше предпринимателей обращаются к услугам разных агентств, веб-студий, чтобы заказать создание лендинга у профессионалов.